Вы здесь

Главная

Экспрессия пресинаптического глутаматного рецептора мозга крысы в дрожжах Pichia pastoris

ID_Статьи: 
31.00

Синтаксин Б - пресинаптический глутаматный рецептор мозга крысы. Он относится к семейству рецепторов N-метил-D-аспартата и принимает активное участие в регуляции проницаемости мембраны нейронов и генерировании постсинаптического потенциала. Нарушения глутаматньгх рецепторов вызывает ряд заболеваний центральной нервной системы - шизофрению, эпилепсию, хорею Гентингтона. Для создания новых лекарственных препаратов, воздействующих на определенный тип рецептора, необходимо изучение его функциональной и структурной организации. Эти исследования требуют значительных количеств гомогенного бежа. Одним из способов решения этой проблемы может быть использование для гетерологичной экспрессии дрожжей Pichia pastor is, что позволяет получать наряду с внутриклеточными аутентичные секреторные формы белков. Ген GR33, кодирующий структуру синтаксина Б, был клонирован в составе вектора рР1С9 под контролем промотора гена алкогольоксидазы I.(AOXI). В результате трансформации линейной формой плазмиды получен штамм дрожжей, который при индукции метанолом секретирует в культуральную среду белок с молекулярной массой около 33 KDa, что соответствует молекулярной массе синтаксинаБ. Уровень продукции рекомбинантного белка составляет 10-15 мг/л среды, что позволяет использовать полученный штамм дрожжей для выделения и очистки синтаксина Б.

Методом полимеразной цепной реакции с праймерами к кодирующей части гена GR33 показано, что клонированный ген содержится в хромосомной ДНК трансформанта. В ходе ПНР появляются, кроме того, пять дополнительных фрагментов ДНК, которые синтезируются и при использовании в качестве матрицы хромосомной ДНК исходного штамма, что позволяет предполагать наличие гомологов синтаксина Б в геноме дрожжей P.pastoris.

 

Градобоева А.Е., Падкина М.В.

Лаборатория биохимической генетики Биологического НИИ СПбГУ, Санкт-Петербург (Россия).