Вы здесь

Главная

Экспрессия мышиного гена lif в прокариотической векторной системе pQE-16

ID_Статьи: 
23.00

Ген lif экспрессируется в мезенхимальных клетках и Т-лимфоцитах животных и человека, в результате чего образуются сигнальные молекулы гликопротеина LIF (Leukemia Inhibitory Factor), которые участвуют в гематопоэзе, нейропоэзе и эмбриогенезе млекопитающих. Этот гликопротеин по строению молекул и функциональной активности классифицирован как цитокин, ингибирующий рост клеток миелоидной лейкемии Ml и цитодифференцировку эмбриональных стволовых клеток млекопитающих. Для культивирования и получения из бластоцист стволовых клеток denovo используются в основном дорогостоящие рекомбинантные препараты LIF, полученные на основе эукариотических векторных систем. Целью наших исследований были поиск прокариотических векторов и разработка генетических конструкций для эффективной экспрессии мышиного гена lif клетках Е. coli. Полагаем, что прокариотические векторные системы обеспечат снижение общих затрат на получение рекомбинантного гликопротеина LIF и сделают эмбриональные стволовые клетки млекопитающих более доступными объектами для биотехнологических исследований.

Для этой цели ген lif из лимфоцитов мыши был клонирован в несколько плазмидных векторов серии pQE по сайгам рестрикции ВаmHI и Bglll. Наличие вставки регистрировали путем рестриктного анализа и секвенирования концевых последовательностей клонированного фрагмента. Полученные конструкции были использованы для трансформации клеток штамма E.coli Ml5, содержащего репрессорную плазмиду pREP-4. Экспрессию гена lif оценивали с помощью химического индуктора IPTG. Наличие цитокина подтверждали электрофоретическим анализом суммарного протеинового пула в 12 % полиакриламидном геле по методу Леммли. В результате этих исследований было выявлено три клона с активной экспрессией гена lif  клетках Е. coli Ml 5 и показано, что плазмидный вектор pQE-16 обеспечивает синтез гликопротеина LIF с молекулярной массой порядка 25 кDа.

 

Петрова P.P., Калошин А.А., Межевикина Л.М.

Институт биофизики клетки РАН, Пущино, Московской обл. (Россия)

НИИ биомедицинской химии РАМН, Москва (Россия)