Вы здесь

Главная

Экспрессия и выделение антибактериального пептида Sarcophaga peregrinа саркотоксина IA из химерного белка

ID_Статьи: 
84.00

Природный антибактериальный пептид саркотоксин IA вырабатывается ли­чинками мух в ответ на повреждение гиподермы стенки тела и высоко токси­чен для широкого ряда грамм-положительных и грамм-отрицательных бактерий.

Нами предложен и разработан способ экспрессии антимикробного пептида саркотоксина IA в составе гибридного белка с GFP, и выделения его в гомоген­ном состоянии. Основная проблема внутриклеточного синтеза полноразмерно­го саркотоксина в составе гибридных белков в Escherichia coli - наличие большого количества участков расщепления сериновыми протеазами в N-koh-цевом участке полипептида. Также существует потенциальная возможность ан­тибактериального действия на клетку хозяина.

Перенос саркотоксинового модуля на С-конец гибридной молекулы белка является способом защиты легко доступного для действия протеаз N-концевого участка саркотоксина. В качестве «белка партнера» для этой цели был использован зеленый флуоресцентный белок EGFP. Для последующего отделения С-кон-цевого модуля EGFP от N-концевого модуля саркотоксина в линкерный участок гибридной молекулы EGFP-Sarc был введен метиониновый аминокислотный остаток, позволивший использовать гидролиз BrCN, после которого разделение и очистка саркотоксина из полученной смеси пептидов осуществлялась методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. Пептиды идентифицирова­лись по N-концевой аминокислотной последовательности. Чистоту полученного препарата проверяли масс-спектрометрически.

Выделенный пептид проверен на антибактериальную активность и была оп­ределена минимальная ингибирующая концентрация (MIC) в отношении четы­рех штаммов грамм-положительных и грамм-отрицательных бактерий.

 

Кулесский Е.А., Скосырев B.C., Темиров Ю.В., Винокуров Л.М.

Филиал института биоорганической химии им. М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинни­кова, Пущино