Вы здесь

Главная

Динамические бислойные полимерные покрытия электрофоретических капилляров, обеспечивающие оптимальные условия разделения белков

ID_Статьи: 
79.00

Метод капиллярного электрофореза (КЭ) в настоящее время находит все более широкое применение в аналитической химии, биохимии, успешно используется для разделения и анализа катионов и анионов, нуклеиновых кислот, их фрагментов. Во многих случаях КЭ белков необходимо проводить при рН=7, когда белки находятся в форме катионов или цвиттер-ионов: КЭ гемоглобинов с выявлением гликозилированного гемоглобина и КЭ инсулина с выявлением дезамидоинсулина. Однако проблема подавления нежелательной адсорбции катионов белков на поверхности капилляра с сохранением преимуществ электроосмотического потока (ЭОП), уменьшающего время анализа, до сих пор не решена.

Нами предложена бислойная динамическая модификация (БМ) внутренней поверхности капилляра катионными (КП, с аммонийными группами) и анионными (АН, с сульфогруппами) полиэлектролитами на основе сополимеров акриламида с подходящими мономерами. БМ позволяет целенаправленно регулировать соотношение заряженного и инертного сегментов и создавать в капилляре заданный ЭОП. Модификация осуществляется последовательным пропусканием через капилляр в течение 1-2 мин раствора КП (1-й слой) и АП с высокой концентрацией ионогенных сульфогрупп (2-й слой). В результате при рН<7 создается такой же сильный ЭОП, который без модификации достигается только при рН=10-11 (в«боратной» системе). Адсорбция белка полностью подавляется из-за образования комплекса катионов белков с АП, имеющего отрицательный суммарный заряд. Бислойные динамические покрытия вьщерживают до 10 последовательных анализов с промежуточной промывкой только рабочим электролитом, затем легко возобновляются после удаления короткой промывкой капилляра 1М NaOH.

Покрытия использовались для экспресс-анализа гликогемоглобина А-1с в крови при диагностике диабета, для контроля процесса очистки инсулина с помощью обращенно-фазовой ВЭЖХ. Рассматриваются возможности модификации покрытий для аффинного КЭ путем молекулярного импринтинга целевого белка-»шаблона» с получением аффинных фаз, способных к селективному распознаванию определенного бежа.

 

ИгруноваА.В., Щеглов А., Шмыков А., Меркулов Д., Рудкевич Н., Мальцев В.Г.

Институт аналитического приборостроения РАН, Санкт-Петербург, Россия