Вы здесь

Главная

Декстрансахараза Leuconostoc mesenteroides СФ-4: выделение и свойства

ID_Статьи: 
63.00

Декстрансахараза(1,6-а-0-глюкан-6-а-глюкозилтрансфераза К.Ф. 2.4.1.5.) (ДС), катализирующая синтез микробного экзополисахарида декстрана, переносит остатки глюкозы от сахарозы на декстран или мальтозу. Известные продуценты ДС принадлежат к бактериям рода Leuconostoc и Streptococcus. Интерес к декстрансахаразе обусловлен, прежде всего, возможностью её использования в технологических процессах получения декстрана и фруктозы из сахарозосодержащего сырья. Этим и обусловлен особый интерес как к выделению и очистке, так и изучению каталитических и биохимических свойств декстрансахаразы. В качестве объекта исследования мы использовали бактерию L. mesenteroides СФ-4, являющуюся промышленным продуцентом декстрана. Для индукции синтеза ДС культуру выращивали на жидкой среде с сахарозой, дрожжевым экстрактом и повышенным содержанием фосфатов. Фермент выделяли из кулыуральной жидкости после второго центрифугирования, используя водное двухфазное разделение между полиэтиленгликолем (ПЭГ) и декстраном. После добавления ПЭГ 15000, обогащенную декстраном фазу, содержащую ДС, концентрировали центрифугированием. Наличие декстрана способствует эффективному осаждению фермента и его стабилизации. Содержание белка определяли по Бредфорду, а декстрансахаразную активность - по количеству редуцирующих Сахаров, используя реакцию с 3,5-динитросалициловой кислотой. Фермент, сконцентрированный в 3,5 раза и степенью очистки 1,15, проявлявлял активность в диапазоне рН 5,0-5,8 с максимумом при рН 5,4. Температурный оптимум действия фермента наблюдался при 30° С. Молекулярная масса ДС, определенная электрофорезом в денатурирующих условиях (12,5% ПААГ) с использованием белковых метчиков (HMW Calibration Kit Proteins), составила 200 kDa. Определены некоторые каталитические и биохимические свойства выделенного фермента.

 

Кротов Г.И.1, Ревин В.В.1, Гоготов И.Н.2

1Мордовский государственный университет им. Н.П. Огарева, Саранск (Россия),

2Институт фундаментальных проблем биологии РАН, Пущино (Россия).