Вы здесь

Главная

Целлобиозодегидрогеназа почвенного гриба ИНБИ 2-26

ID_Статьи: 
52.00

Целлобиозодегидрогеназа (CDH) - внеклеточный флавоцитохром, образуемый рядом древо- и целлюлозоразрушающих грибов. Она может, как генерировать, так и восстанавливать свободные радикалы, одновременно окисляя целлобиозу -продукт ферментативного разложения целлюлозы. Интерес к CDH вызван ее применением в безмедиаторных биосенсорах с амплификацией сигнала для определения ксенобиотиков, а также биогенных катехоламинов.

Нами выделена CDH из безлакказного клона неспорогенного почвенного гриба ИНБИ 2-26, обнаруженного в южно­вьетнамских почвах с высоким содержанием диоксинов (следствие обработки дефолиантом в годы вьетнамской войны). Молекулярная масса CDH составляет * 94 Кда. CDH окисляет целлобиозу (Кm37; 4.5±1.5 и 5М при рН 4, 6 и 8, соотв.) и лактозу (Km56 пМ при рН 6), восстанавливая дихлорфенолиндофенол (ДФИ) или цитохром с3+. Моносахариды (L-Rha, 2-дезокси-D-Glc и D-Glc), а также мальтоза (>2 мМ) и молекулярный кислород - очень плохие субстраты CDH. Гентиобиоза и хитотриоза также слабо окисляются при концентрациях 0.5-1 мМ. Ни гентиобиоза, ни хитотриоза, ни метил-в-целлобиозид в концентрациях, в 100 раз превышающих концентрацию лактозы, не ингибировали действие CDH. Как и другие CDH, фермент селективно адсорбируется на целлюлозе. В цитратно-фосфатном буфере при рН от 4 до 8 CDH сохраняет > 50% максимальной активности (рН 5.5-7) с целлобиозой и ДФИ в качествесубстратов. Она менее термостабильна, чем грибные целлюлазы (т1/2<5 мин при 60°С).

В ходе опыта было выявленно, что данный фермент теряет активность при интенсивном встряхивании в течение 1-2 часов. При 55°С т1/2»1ч (рН 6), а при рН4и8-в20и4 раза меньше. Восстановление целлобиозой при рН 4 и 8 повышает стабильность CDH ДФИ в 3-7 раз, а окисление фермента ДФИ в 8 раз снижает стабильность при рН 6 по сравнению с восстановленной формой CDH.

 

Карапетян К.Н.1, Ячкова С.Н.1,2

1Институт биохимии им. А.Н.Баха РАН, г. Москва,

2 Институт экологии ресурсосбережения и оборудования сервиса МГУс г. Мытищи, Московская область