Вы здесь

Главная

Биосинтез модифицированной глутамилэндопептидазы Bacillus intermedius рекомбинантным штаммом Bacillus subtilis

ID_Статьи: 
14.00

Бактерии В. intermedius секретирует в среду глутамилэндопептидазу, которая обладает субстратной специфичностью по отношению к глутаминовой или аспарагиновой аминокислотам и относится к классу сериновых протеиназ. Ранее были подробно изучены пути регуляции биосинтеза глутамилэндопептидазы В. intermedius. Ген фермента был клонирован в клетках В. subtilis, секвенирован. Для исследования структурной организации и функциональных связей в молекуле глутамилэндопептидазы В intermedius был проведён направленный мутагенез, в результате чего удалось получить вариант глутамилэндопептидазы, несущей замену в позиции His 186 (His186/Thr).

В данной работе исследовали регуляцию биосинтеза модифицированной глутамил-эндопептидазы В. intermedius в рекомбинантном штамме В. subtilis. Показано, что глутамилэндопептидаза появляется в культуральной жидкости рекомбинантного штамма в стадии замедления роста, максимум продукции фермента приходится на стационарную фазу роста культуры (20 ч роста). В многофакторных экспериментах подобрано оптимальное соотношение шнцентраций основных компонентов питательной среды (пептон, неорганический фосфат, дрожжевой экстракт) для накопления модифицированной глутамилэндопептидазы в культуральной жидкости рекомбинантного штамма В. subtilis. Оптимальным для эффективной продукции фермента явилось содержание в среде пептона - 20 г/л, неорганического фосфата - 0,35 г/л, дрожжевого экстракта -1,5%. Исследовано влияние ионов Са2+и Со2+ на биосинтез глутамил-эндопептидазы. При внесении в среду ионов Са2+ в концентрации 2 мМ продукция фермента повышалась на 70% по сравнению с контролем. Присутствие в среде культивирования ионов Со2+ в концентрации 2 мМ увеличивало продуктивность культуры в отношении синтеза модифицированной глутамилэндопептидазы в 2,5 раза.

 

Останина Е.С., Сафина Д.Р., Габдрахманова Л.А.

Казанский государственный университет,

Казань Институт молекулярной генетики РАН, Москва