Вы здесь

Главная

Биохимическая характезизация когезина S. cerevisiae

ID_Статьи: 
85.00

Когезия сестринских хроматид представляет собой комплексный процесс, необходимый для поддержания целостности генома во всех эукариотических организмах. Нарушения когезии в клетках человека могут приводить к различным генетическим заболеваниям. Основой молекулярного аппарата когезии является белковый комплекс когезин.

Цели и задачи. Целью данной работы была экспрессия, очистка и биохимическая характеризация когезина Saccharomyces cervisiae, состоящего из четырех субьединиц Smcl, Smc3, Mcdl/Sccl и Scc3.

Методы. Рекомбинантный белковый комплекс был экспрессирован в клетках насекомых и очищен с использованием аффинной хроматографии и гель-фильтрации. Субстраты для реакций связывания были приготовлены при помощи PCR и ультра-центрифугирования. Источником гистонов были эритроциты курицы. Для биохимической характеризации комплекса использовались методики ретардации, связывания на колонках и Western blot.

Результаты и выводы. 1) Впервые был выделен и охарактеризован четырех-субъединичный комплекс когезин S. cervisiae: 2) Была проанализирована субстрат-специфичность когезина: а) показано что последовательность ДНК не влияет на связывание когезина; б) показано, что когезин связывается с хроматином со значительно большей аффинностью чем с ДНК; 3) Показано, что связывание когезина с хроматином не зависит от хвостов коревых гистонов.

На основании полученных результатов была предложена модель связывания когезина непосредственно с нуклеосомами и выдвинута гипотеза о том что местоположение сайтов когезии регулируется структурой хроматина.

 

Каганский А.М.1, Лукьянов Д.В.2, Ланцов В.А.1, Струнников А.В.3

1Петербургский институт ядерной физики, РАН, Санкт-Петербург (Россия)

2йнститут цитологии РАН, Санкт-Петербург (Россия)

3NICHD, Национальные институты здоровья, Бетезда (США)