Вы здесь

Главная

Белковый дизайн Са2+-связывающего белка рековерина: создание искусственного кальцийсвязывающего участка в молекуле рековерина

ID_Статьи: 
85.00

Рековерин - Са2+-связывающий белок (23 kDa), в молекуле которого присутствуют четыре потенциальных центра связывания кальция. Из них только два - 2-й и 3-й - имеют каноническую аминокислотную последовательность и пространственную структуру, присущую Са2+-связывающему мотиву, типа «EF-hand», и действительно способны связывать ионы Са2+. В то же время 1-й и 4-й центры являются Са2+-связывающими лишь потенциально.

Ранее нами были получены и охарактеризованы мутантные формы рековерина E85Q и E121Q с выключенными вторым и третьим Са2+-связывающим центрами, соответственно. Мы обнаружили, что мутантная форма рековерина E121Q не способна связывать ионы кальция, несмотря на присутствие в его структуре нативного 2-го Са2+-связывающего участка. Эти данные позволили нам предположить существование механизма последовательного заполнения кальцием Са2+-связывающих участков в молекуле рековерина, т. е. сначала происходит связывание Са2+ в 3-ем EF-центре и только потом во 2-ом. Неспособность связывать ионы кальция мутантной формой рековерина с заменой E121Q не позволила нам охарактеризовать роль этого Са2+-связывающего центра для проявления функциональной активности бежа.

В настоящей работе нами был проведен белковый дизайн мутантной формы E121Q молекулы рековерина, в результате которого данный мутант приобрел способность связывать ионы кальция вторым Са2+-связывающим центром. Мы изучили свойства полученного белка и определили роль второго Са2+-связывающего участка во взаимодействии рековерина с фосфолипидными мембранами и регуляции его функциональной мишени - родопсинкиназы.

 

Чурюмова В.А.1, Ваганова С.А.1, Зинченко Д.В.1, Заргаров А.А.1, Сенин И.И.2

1Филиал Института биоорганической химии им. М.М.Шемякина и Ю.А.Овчинникова РАН, Пущино

2НЙЙ физико-химической биологии им. АН, Белозерского МГУ, Москва