Вы здесь

Главная

Белковая инженерия эндо-b-глюканазы III

ID_Статьи: 
31.00

 

Ферментативный гидролиз целлюлозы осуществляется комплексом целлюлолитических ферментов. Фермент эндо-b-глюканаза III (КФ 3.2.1.4, ЭГIII) из грибов Penicillium verruculosum катализирует реакцию расщепления целлюлозы по 1,4 - связи и относится к классу целлюлаз. На практике фермент находит свое применение в пищевой и целлюлозно-бумажной промышленности, а также в текстильной промышленности, как эффективная добавка к стиральным порошкам. ЭГ III обладает рН оптимумом активности 5.0, в то время как для практического использования фермента требуются более щелочные значения рН. Аналогичный фермент из Trichoderma reesie имеет более высокое значение рН оптимума активности. Сравнение аминокислотных последовательностей данных ферментов показало, что единственным существенным отличием является остаток Asp 113.

Целью данной работы было создание штамма E.coli - продуцента ЭГ III, получение мутантного фермента с заменой Asp 113 Asn и изучение свойств рекомбинантных ферментов дикого типа и мутанта. Для экспрессии ЭГ III в клетках Е. coli из исходного гена фермента методом ПЦР были удалены два интрона. Далее была осуществлена экспрессия ЭГ III и получен мутант, содержащий аминокислотную замену Asp 113 Asn.

 

Попова А.С., Давыдова Е.Е.

МГУ им. М.В.Ломоносова, химический факультет, кафедра химической энзимологии