Вы здесь

Главная

Бактериальная экспрессия РН домена онкобелка Всr/Аbl и получение поликлональных антител для его иммунохимической детекции

ID_Статьи: 
33.00

Экспрессия химерного белка Всr/Аbl наблюдается в 95% случаев хрони­ческого миелолейкоза (ХМЛ) и в половине случаев острой лимфобластной лейкемии (ОЛЛ). Цитогенетической основой возникновения химерного гена bcr/abl является реципрокная транслокация t(9; 22), ведущая к слиянию З-обла-сти гена аЫ с 5'-областью гена bcr. Если область разрывов гена аbl консерва­тивна и принадлежит интронной области между экзонами 1 и 2, то для гена bcr известны три такие области - m-Bcr, M-bcr и m-Bcr, разрывы в которых приво­дят к экспрессии химерных белков Всг/Аbl р190, р210 и р230 соответственно. Длина Bcr части белка Всr/Аbl коррелирует с остротой протекания заболева­ния. Так, р190 характерен только для ОЛЛ, р210 - как для ХМЛ и ОЛЛ, а р230 -для относительно доброкачественной моноцитарной лейкемии. Одной из при­чин прогрессии ХМЛ могут служить функциональные изменения той области белка р210, которая отсутствует у р190. Эта область включает Dbl и плекстрип (РН) гомологичные домены. Предположительная функция РН домена Всr/Аbl белка - связывание с фосфолипидами клеточных мембран. Для анализа воз­можных структурно -функциональных изменений белка р210 во время опухоле­вой прогрессии и оценки уровня его экспрессии у больных ХМЛ, нами были получены поликлональные антитела к РН домену Всr/Аbl. Для этого фрагмент кДНК bcr/abl с 2744 по 3312 п.о. был ПЦР-амплифицирован и клонирован по сайту EcoRV в вектор для бактериальной экспрессии рЕТ32Ь. Рекомбинант-ный белок размером 44 кДа был очищен в виде телец включения до чистоты 80-85% и использован для получения поликлональных антител. Полученные антитела могут быть использованы для количественного анализа экспрессии р210 Всr/Аbl и его нормального гомолога Всr, скрининга возможных делецион-ных мутаций РН домена белка Всг/ АЫ в ходе опухолевой прогрессии, изучения клеточной локализации Всr/Аbl у больных на разных стадиях ХМЛ.

 

Волошаненко О.С., Дубровская А.Н., Телегеев Г.Д., Малюта С.С.

Институт молекулярной биологии и генетики, Киев (Украина)