Вы здесь

Главная

Анализ точечных мутаций в гене тиопурин-s-метилтрансферазы (ТПМТ) человека с использованием технологии биочипов

ID_Статьи: 
119.00

Тиопурин S-метилтрансфераза (ТПМТ; ЕС 2.1.1.67) - цитоплазматический фермент, который катализирует S-метилирование ароматических и гетероциклических сульфгидрильных соединений, включающих производные тиопурина. Производные тиопурина (азатиоприн, меркаптоггурин и тиогуанин) широко используются как иммуносупрессорные и противоопухолевые агенты: при трансплантации органов, для лечения лейкозов, аутоиммунных и хронических воспалительных заболеваний.

Наследственная недостаточность ТПМТ определяет непереносимость тиопуринов, в этом случае стандартные дозы этих лекарственных препаратов могут оказаться высокотоксичны и привести к летальному исходу. В настоящее время описано около восеми точечных мутаций, приводящих к снижению активности ТПМТ-фермента.

В Центре биологических микрочипов ИМБ РАН разработан метод анализа SNP, основанный на гибридизации с микрочипами, представляющими собой закрепленные на поверхности стекла гелевые элементы с иммобилизованными олигонуклеотидными пробами. Метод включает ассиметричную ПЦР с праймерами, меченными флуоресцентным красителем, и последующую гибридизацию меченного продукта с микрочипом. В результате гибридизации ПЦР-продукты связываются с соответствующими им комплементарными зондами. Нами разработан ТРМТ-чип, охватывающий наиболее распространенные точечные мутации, приводящие к потере активности ТПМТ-фермента. Этот биочип позволяет с высокой достоверностью определять наличие той или иной мутации в исследуемом образце.

 

Федорова О.Е.1, Глотов А.С.1, Крынецкий Е.Ю.2, Крынецкая Н.Ф.2, Чупова Н.В.3, Наседкина Т.В.1  

1Институт молекулярной биологии им. В.А, Энгельгардта РАН, Москва (Россия)

2Детский госпиталь Св.Иуды, Мемфис, (США)

3Институт детской гематологии МЗ РФ, Москва, Россия