Вы здесь

Главная

Анализ микроокружений триптофановых и тирозиновых остатков и спектральные свойства GlnBP

ID_Статьи: 
80.00

Собственная УФ-флуоресценция белков является мощным средством изучения их структуры, динамики и фолдинга. Использование этого метода особенно эффективно, если экспериментальные результаты анализируются с учетом данных о пространственной локализации триптофановых и тирозиновых остатков белка. Цель работы состояла в том, чтобы изучить особенности микроокружений Тrр и Туr остатков и объяснить флуоресцентные свойства глутамин-связывающего белка (GlnBP) - одного из основных белков системы транспорта глутамина в клетку в грам-отрицательных бактериях. Показано, что спектры флуоресценции GlnBP и его комплекса с Gin отличаются незначительно. Это объясняется тем, что, хотя структура GlnBP при связывании с Gin изменяется существенно, микроокружение Тгр остатков меняется мало. Сравнение спектров флуоресценции, измеренных при длинах волн 280 и 297 нм и нормированных в длинноволновой области спектра, показало, что вклад Туr остатков в суммарную флуоресценцию белка незначителен для нативного белка и существенно возрастает при разворачивании белка. Расчеты показали, что возможен эффективный перенос энергии от Туr к Тrр остаткам и между Туr остатками. Незначительный вклад Туr остатков во флуоресценцию GlnBP можно объяснить существованием эффективного переноса энергии от Туг к Тrр остаткам. Однако, в этом случае уменьшение интенсивности триптофановой флуоресценции (1еm = 365 нм) при разворачивании белка должно быть больше при возбуждении на длине волны 280 нм, чем при возбуждении на 297 нм. Оказалось, что это не так. Сделан вывод о том, что незначительный вклад Туr остатков во флуоресценцию нативного GlnBP обусловлен наличием эффективных тушащих групп в близи Туг остатков и переносом энергии от Туr к другим Туr остаткам, в близи которых имеются тушащие группы, а не переносом энергии от Туr к Тrр остаткам.

 

Степаненко Ольга В.1, Кузнецова И.М.1, Стаяно М.2, ДАриа С.2

1Институт Цитологии РАН, Санкт-Петербург (Россия)

2Институт Биохимии Белка, Неаполь (Италия)