Вы здесь

Главная

Анализ функционирования промоторов гуанилспецифичных низкомолекулярных рибонуклеаз бацилл

ID_Статьи: 
80.00

Установлено, что по регуляции биосинтеза все изученные гуанилспецифичные секретируемые РНКазы бацилл разделяются на регулируемые и нерегулируемые экзогенным неорганическим фосфатом. При этом регуляция экспрессии генов биназы I (В. intermedius) и РНКазы Bpu (В. pumilus) активируется в условиях фосфатного голодания и регулируется специфическими внутриклеточными белками-регуляторами PhoP-PhoR. РНКаза В. amyloliquefaciens - барназа - относится к нерегулируемым неорганическим фосфатом рибонуклеазам, а регуляторная область гена барназы абсолютно отличается от регуляторной области генов биназы I и РНКазы Ври.

Для независимого анализа функционирования промоторов гуанилспецифичных низкомолекулярных РНКаз бацилл в рекомбинантных штаммах Е. coli были сконструированы плазмиды, в которых промоторы генов рибонуклеаз сшиты с репортерным геном lacZ - pMZ410 (с промотором биназы), pMZ610 (с промотором РНКазы Bp) и pMZ710 (с промотором барназы). Промоторы были амплифицированы с помощью ПЦР, с использованием праймеров, содержащих сайты рестрикции BamHI и Hindlll, а затем лигировали по соответствующим сайтам в полилинкер плазмиды pQF50, несущей беспромоторный ген lacZ. Этими плазмидами был трансформирован изогенный штамм Е. coli MC4J00. Об экспрессии гена lacZ, обеспечиваемой бациллярными промоторами, судили по величине активности р-галактозидазы, продуцируемой рекомбинантными штаммами, выращенными на бесфосфорной среде. Установлено, что уровень активности (3-галактозидазы, направляемый с промоторов биназы и РНКазы Bp, в контрольном и в дефектном штаммах был одинаков. В то же время синтез Р-галактозидазы с промотора барназы превысил уровень синтеза этого фермента с промоторов биназы и РНКазы Bp в 6 и 5 раз соответственно.

 

Вершинина O.A., Харитонова М.А.

Казанский государственный университет, Казань (Россия)