Вы здесь

Главная

Анализ экспрессии сигнальных белков во вкусовых клетках

ID_Статьи: 
17.00

Анализ химического состава пищи начинается с возбуждения специализированных клеток, называемых вкусовыми рецепторными клетками (ВРК). Хотя многие детали этого процесса неизвестны, можно считать установленным, что возбуждение ВРК химическими стимулами происходит при участии внутриклеточных каскадов усиления, ключевыми элементами которых являются трансмембранные рецепторы, G-белки и эффекторные ферменты, генерирующие внутриклеточные медиаторы. Используя Са2+ флуоресцентный зонд Fura-2 для измерения концентрации свободного кальция ([Са2+]in) в цитоплазме ВРК и электрофизиологический метод patch clamp, мы исследовали механизмы Са2+ сигнализации во ВРК мыши. В частности, нами было показано, что ВРК экспрессируют пуринорецепторы, которые фармакологически и функционально были идентифицированы как рецепторы Р2у типа. Установлено, что активация P2Y рецепторов приводит к активации фоефоинозитидного пути сигнального каскада и мобилизации внутриклеточного Са2+ . Кроме того, мы идентифицировали электрофизиологически субпопуляцию ВРК, которые экспрессируют потенциал-зависимые Са2+ каналы. Следующим шагом исследований был ПЦР анализ экспрессии сигнальных белков, которые вовлечены в Са2+сигнализацию в цитоплазме ВРК. РНК выделяли из вкусовой ткани мышей при помощи биотинилированньгх магнитных частиц с oligo (dT) «хвостом». Обратная транскрипция проводилась стандартным методом. Полученная кДНК амплифицировалась при помощи полимеразной цепной реакции гнездового типа с праймерами к генам, кодирующим следующие белки: R-субьединица потенциал-зависимого кальциевого канала, F - субъединица потенциал-зависимого кальциевого канала, кальций-зависимый хлорный канал, TRPV3, TRPM7, P2Y2, P2Y4, P2Y12 - рецепторы, аденилатциклаза типа 6, фософодиэстераза типа 1В. Анализ результатов ПЦР проводился электрофоретическим методом в 2% агарозном геле.В результате проведенного анализа установлено, что во вкусовой ткани эксперссируются P2Y2, P2Y4 - рецепторы, аденилатциклаза типа 6, фософодиэстераза типа IB, F - субъединица потенциал - зависимого кальциевого канала.

 

Патрушев М.В., Краева Ю.Е., Рогачевская О.А., Барышников С.Г., Романов Р.А.

Институт биофизики клетки, Пущино (Россия)