Вы здесь

Главная

Альтернативные системы интеграции рекомбинантных плазмид для генно-инженерного конструирования штаммов стрептомицетов

ID_Статьи: 
8.00

Стрептомицеты - грамм-положительные бактерии, синтезирующие большинство известных антибиотиков. Одним из наиболее важных заданий генной инженерии является разработка эффективных систем переноса рекомбинантных ДНК в клетки стрептомицетов.

Мы использовали конъюгацию с Е. coli ЕТ12567 (pUB307) для переноса вектора pSETl 52, несущего ген интегразы и attP-сайт актинофага ШС31, в ряд штаммов стрептомицетов - Streptomyces globisporus 1912, S .peucetius ATCC29085, S. fradiae Tu2717, S. kanamyceticus 1, S. coelicolor Ml38, S. lividans TK24, S. globisporus Smu62. Оказалось, что интеграция pSET152 угнетает продукцию антибиотиков у этих штаммов. Эксконъюганты pSETl 52+ штамма S. nogalater не выделены, что, очевидно, связано с отсутствием в геноме этого штамма сайтов интеграции фага ШСЗ1.

Нами сконструирован плазмидный вектор pWVB с геном интегразы и attP-сайтом другого актинофага - WVB. Были получены штаммы S. globisporus 1912, S. fradiae Tu2717, S. kanamyceticus 1, S. nogalater 1MET43360, несущие плазмиду pWVB, с частотой, что не отличалась от частоты возникновения pSET152+ эксконъюгантов. Анализ полученных эксконъюгантов показал, что интеграция pWVB не ингибирует продукцию антибиотиков у исследованных штаммов и стабильно наследуется при культивировании в неселективных условиях.

Таким образом, использование альтернативной системы интеграции вектора pWVB дает возможность получения рекомбинантных штаммов стрептомицетов, для которых невозможно использование pSET152.

 

Аравицкая А.В.1, Громыко А.Н.1, Ребец Ю.В.1, Осташ Б.Е.1, Лужецкий А.Н.1, Василия Л.И.1, Бехтольд А.2, Федоренко В.А.1

1Львовский национальный университет иени Ивана Франко, Украина

2Фрайбургский университет, ФРГ